Sequentiereactie

Uit Wikipedia, de vrije encyclopedie
Ga naar: navigatie, zoeken
DNA sequentie op gel

Een sequentiereactie is een werkwijze om DNA te ontleden.

De DNA-sequentie geeft de gelegenheid om een grondige analyse van het DNA te verrichten omdat het voorziet van de meeste basis informatie van alles: de sequentie van nucleotiden. Deze kennis laat toe om bijvoorbeeld regulerende en gen sequenties op te sporen, vergelijkingen te maken tussen homologe genen tussen soorten en mutaties te identificeren.

Sangers methode is gebaseerd op het gebruik van di-deoxynucleotiden (ddNTP’s) naast de normale nucleotiden (NTP’s) die in DNA gevonden worden. Deze gemodificeerde nucleotiden, wanneer deze worden geïntegreerd in een sequentie, voorkomen de toevoeging van verdere nucleotiden. Voor het DNA kan worden gesequentieerd, moet het in enkele draden gedenatureerd worden met behulp van warmte. Vervolgens wordt er een primer verbonden aan één van de template draden. Deze primer wordt zo geconstrueerd dat zijn 3' einde naast de DNA sequentie ligt die van belang is. Het primer of één van de nucleotide moet radioactief of fluorescerend gemerkt zijn zodat het eindproduct op een gel kan worden gedetecteerd.

Een gelijksoortige methode is om de ddNTP’s te kleuren met verschillende kleurstoffen. Deze kleurstoffen fluoresceren bij verschillende golflengtes, die door een machine worden gelezen. Het resultaat is een piekenpatroon dat de sequentie weergeeft van het DNA.